项目名称： 卵巢癌新标志物研发体系的建立与临床应用
奖项等级： 二等奖
完成单位：复旦大学附属肿瘤医院
主要完成人： 卢仁泉、马晓路、郭林、严天晴、谢素红
项目第一完成人照片及个人简介
卢仁泉教授
主任技师，博士研究生导师
职务：复旦大学附属肿瘤医院检验科、精准中心副主任
擅长领域：肿瘤标志物的基础及临床研究
肿瘤的诊疗及其免疫微环境调控和耐药机制的研究
社会兼职：
上海抗癌协会肿瘤标志物专业委员会主任委员
中国中西医结合学会肿瘤免疫委员会主任委员
上海抗癌协会检验医学专业委员会副主委
中国抗癌协会肿瘤标志物委员会常委
上海医学会检验分会常委
国自然基金评审专家
获奖：获中国抗癌协会科技奖二等奖（第一完成人，2019）、上海市抗癌科技奖一等奖2次（均第一完成人，2018、2020）、三等奖1次（2016）、上海市优秀发明奖金奖1次（第一完成人，2021）、银奖2次（2012、2018）
项目介绍
一、项目简介
在我国，卵巢癌年发病率居女性生殖系统肿瘤第3位，是严重威胁女性健康的恶性肿瘤。卵巢深处盆腔，卵巢病变处于早期时常无特异临床症状，因出现症状就诊时，70%的患者已处于晚期。现有基于普通人群的研究资料显示，无论是糖类抗原（carbohydrate antigen，CA）125、经阴道超声单独筛查还是二者联合，均不能达到满意的筛查效果。此外，对于卵巢癌患者预后评估，至今亦缺乏足够优秀的临床检验靶标。本项目中，申请人在发现核酸内切酶MUS81在卵巢癌中表达特异性升高及MUS81相关蛋白网络直接参与调控卵巢癌进展的基础上，进一步开发基于电泳方法的可视化检测体系，可对MUS81酶活性进行半定量检测，为卵巢癌诊断、预后评估带来全新思维。
二、项目主要创新点
关键创新点与优势：
1．开发了全新、适用于多种临床样本类型的核酸内切酶MUS81酶活性的检测试剂盒，可以用于肿瘤患者的早诊早筛，具备优异的技术创新性。以下是自建检测体系的性能评估结果：
通过建立梯度时间-消化曲线，我们将最优酶切时间确定为30分钟。
电泳检测体系与反应体系内MUS81的活性或细胞总量均有良好的相关性。
2. 证实MUS81酶活性检测具有良好的疗效监测及预后评估价值，具备优良的临床应用先进性。
基于自建MUS81活性检测体系，我们发现恶性肿瘤组织的MUS81活性显著强于正常对照组织。
3. 稳定性验证
进一步对检测体系的重复性进行了相关验证。使用的是以相同方法配制的两批0.8%琼脂糖凝胶，pwpxl质粒的上样量都是200ng，120V电泳30min后在相同条件下曝光拍照，最后使用Image J扫描条带亮度并计算批内的变异系数和总体的变异系数。结果如下表所示：
均值 | 标准差 | 变异系数 | |
第一批 第二批 总体 | 0.0036 0.0042 0.0039 | 0.0002 0.0003 0.0003 | 4.82% 7.90% 7.73% |
结果显示，两批的精密度（CV）均不大于10.0%，且各个图像中的条带位置基本保持一致。总体的精密度（CV）不大于10.0%。
4. 临床标本验证
MUS81酶活性在不同类型的恶性肿瘤中均显著升高，且在转移瘤中升高更为显著。
卵巢癌人群外周血的MUS81活性强于健康对照，且在手术治疗后发生明显下降。
扩大队列人数的结果同样证实，卵巢癌患者外周血MUS81酶活性显著增强，且在治疗后发生明显下降。
本项目核心技术已获专利授权，专利号ZL201510848835.7。且本专利于2021年成功实现转化。
综上所述，项目组首次建立了完整的组织细胞与外周血MUS81酶活性检测方法并成功开发试剂盒应用于临床标本的检测。基于自研试剂盒，我们首次证实MUS81酶活性在实体肿瘤患者中显著升高；针对卵巢癌而言，MUS81酶活性在肿瘤发生早期即显著增高，且在治疗后发生显著下降，提示其可作为卵巢癌早期诊断与疗效，乃至于预后评估的潜在标志物。课题相关成果也作为研究基础，成功申请国家自然科学基金1项。
三、项目主要解决的问题
开发了应用DNA凝胶电泳法结合荧光成像技术的方法，检测肿瘤患者来源的PBMC或血清/浆样本中的MUS81酶活性，用于肿瘤患者的早诊早筛、预后评估。
四、项目应用前景
目前，国内外仍无针对MUS81活性检测的特异性检测方案与成品试剂盒。本发明在填补这一缺陷的基础上，进一步证明了MUS81活性检测的临床价值。
如下表所示，MUS81活性检测相较于传统的血浆蛋白类肿瘤标志物及常规影像学检查，具有更好的时效性、更少的交叉反应，且与肿瘤患者预后直接关联；此外，MUS81检测具有“随时采样，随时检测”的技术优越性，适用于监测各类癌前疾病，预警肿瘤发生，从而为社区癌症早筛提供了优秀的靶标与成熟的检测方案。综上，整体上本项目具备有国内一流水准。
更重要的是，本项目所研发的检测试剂盒成功获得专利授权，专利名“一种核酸内切酶MUS81检测试剂盒及其检测方法和应用”，专利号：ZL201510848838.7；在授权后成功实现转化，这是政府与企业对本项目研究成果认可的最直接证据。此外，基于本项目自研试剂盒开展的临床相关研究也成功发表于BMC Biochemistry杂志，目前论文下载量超过5000次，且被Frontiers in Oncology等SCI杂志所引用，受到评审专家一致好评。在此基础上项目组进一步开发了应用DNA凝胶电泳法结合荧光成像技术的方法，用于检测肿瘤患者来源的PBMC或血清/浆样本中的MUS81酶活性。通过小规模临床队列验证，证实此检测策略具有灵敏度高、重复性好的优势。项目组已开展小样制备工作，目前已逐步用于肿瘤医院患者的检测。已初步形成原型试剂盒的设计，并已在筹备临床试验的注册，拟在2024年上半年实现中试生产，并完成临床试验注册，2025年完成试剂盒注册与批量生产，并开始销售，逐步实现盈利。