郭涛, 宋宁, 孙玉琪, 田佳琪, 唐婕, 孙榕婍, 蒋英英
摘要：
背景与目的：肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）是全球常见的肿瘤之一，目前已证实长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）参与HCC的发生、发展。近期有研究发现作为一种功能性的lncRNA，即长基因间非蛋白编码RNA 671（long intergenic non-protein coding RNA 671，LINC00671）可能是新的抑癌分子，但其在HCC中的作用及分子机制尚不清楚。本研究旨在探讨LINC00671在HCC中的作用及可能的分子机制。方法：通过GEPIA、starBase数据库分析LINC00671在HCC及正常肝组织中的表达及预后情况；采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测LINC00671在不同HCC细胞系中的表达差异；再采用RNA荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）实验观察LINC00671亚细胞定位。体外敲低或过表达LINC00671后，利用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）、流式细胞术、细胞划痕及transwell实验分别观察LINC00671对HCC细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。随后通过生物信息学预测LINC00671作为细胞核内lncRNA的下游靶分子，starBase、GEPIA数据库分析LINC00671与靶分子c-myc的相关性并进行RTFQ-PCR及蛋白质印迹法（Western blot）验证。最后，通过甲基化DNA免疫共沉淀PCR（methylated DNA immunoprecipitation-PCR，MeDIP-PCR）观察LINC00671对靶基因启动子甲基化水平的影响。结果：数据库分析结果显示，LINC00671在HCC组织中明显下调且其高表达预示着较好的预后（P <0.05）；LINC00671在不同HCC细胞系中表达下调且存在表达差异；LINC00671主要分布于细胞核内。体外肿瘤细胞行为学实验发现，LINC00671可以明显抑制HCC细胞的增殖、迁移及侵袭能力（P<0.05），同时其对细胞凋亡具有显著促进作用（P<0.05）。生物信息学分析结果显示，LINC00671在核内与癌基因c-myc启动子区可能存在Hoogsteen配对，数据库结果比对显示，LINC00671与c-myc表达水平呈现显著负相关（P<0.05）；LINC00671可以显著下调c-myc表达（P<0.05）。MeDIP-PCR结果显示，LINC00671可以增加c-myc启动子甲基化水平（P<0.05）。结论：LINC00671可能通过介导c-myc启动子甲基化下调后者表达从而抑制HCC进展。
中图分类号:
| [1] | 黄国全,黎 晖,张才全,等. CDC4及c-Myc在胃癌中的表达及临床意义[J]. 中国癌症杂志, 2015, 25(12): 933-939. |